Coloration au bleu de méthylène

Définition :

Le bleu de méthylène (ou chlorure de méthylthioninium) est un composé organique dont le nom en nomenclature systématique est 3,7-bis-(dimethylamino)phenazathionium. Le bleu de méthylène est soluble dans l'eau et plus légèrement dans l'alcool. Il fut synthétisé la première fois par Heinrich Caro en 1876.

Il fait partie de la liste des médicaments essentiels de l'Organisation mondiale de la santé .

La coloration au Bleu de méthylène n’est pas, à proprement parler, une coloration bactériologique mais elle est pourtant très utilisée en bactériologie.
A l’inverse du Gram ou du ziehl-neelsen, elle n’apporte aucune information sur la nature des bactéries.

Ne permet pas de différencier les bactéries de même morphologie.

La raison de cette utilisation est que c’est une coloration :
 très simple et rapide à effectuer, qu’elle colore toutes les bactéries à l’exception des mycobactéries, qu’elle respecte mieux la structure des cellules que le Gram.

On l’utilisera donc lorsqu’on veut seulement et rapidement :
 s’assurer qu’il y a bien des bactéries visibles dans le prélèvement voir :

•    leurs formes :bacilles, coques...(voir fiche correspondante)
•    leurs groupements: isolées, par 2, en amas, en chaînettes.
•   leurs rapports avec les cellules (dans/sur des cellules) bien voir les cellules présentes.

Technique :

•      Réaliser un frottis et le fixer
•      Le recouvrir de bleu de méthylène  et laisser agir 3 min
•      Rincer à l'eau distillée
•      Sécher entre 2 feuilles de papier essuie-tout.

Utilisation du bleu de méthylène pour examen entre lame et lamelle (état frais) :

Lorsque vous examinez des préparations entre lame et lamelle, si le contraste est médiocre, on peut :
 mettre quelques gouttes de bleu dans 1 ml de prélèvement,
 laisser en contact 5 à 10 mn,
 examiner une goutte de ce mélange.

Bactéries et cellules, très légèrement colorées en bleu, apparaissent plus nettement.

Observation :

Examiner à l'objectif x100 à immersion (avec une goutte d'huile) avec un éclairage important (diaphragme ouvert).

Toutes les cellules apparaissent colorées en bleu.

 Les Notes :

Bactéries du yaourt coloré au bleu de méthylène

•     La morphologie des bactéries: bacilles, coques...
•      Leur mode de groupement: isolées, par 2, en amas, en chaînettes.
•      La présence de cellules  (polynucléaires, cellules épithéliales...).
•      Coloration simple et rapide qui permet d'apprécier la morphologie des bactéries.
•       Peu d'échecs possibles.