II-Concentration biologique :
Technique de concentration des parasites dans le sang :
Matériels et réactifs :
Ø L’eau du robinet
Ø Le méthanol (May-Grunwald)
Ø Solution de Giemsa
Ø Une lame
Ø Microscope
Procédure :
La goutte épaisse : il s’agit d’une microtechnique d’enrichissement qui permet d’observer sur une petite surface beaucoup plus de sang que sur un frottis.
Ø Déposer une goutte de sang au centre de la lame
Ø Tourner régulièrement dans la goutte tout en l’étalant, pendant deux minutes, à l’aide de la pointe d’un vaccinostyle ou le coin d’une lame pour défibriner le sang.
Ø Mettre la lame à l’arbi des poussières et des mouches pendant 4 à 24 heures selon la température ou mettre à l’étuve à 28-40°C pendant 5 minutes.
Ø Plonger la lame pendant 5 à 10 minutes dans un verre à pied contenant de l’eau du robinet jusqu’à ce que la préparation soit claire (hémolyse complète).
Ø Retirer la lame et laisser sécher à plat.
Ø Fixer par le méthanol
Ø Colorer par une solution de Giemsa pendant 20minutes.
Ø Rincer à l’eau, laisser sécher et examiner à l’immersion.
Remarques : une technique plus simple consiste à recouvrir la lame de Giemsa dilué à raison d’une goutte par ml, laisser agir pendant 1 heur, laver à l’eau et sécher.La coloration rapide à l’aide du coffret RAL 555 peut être utilisée.
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